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厭氧菌的培養與初步鑒別

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2011-01-04  來(lái)源:互聯(lián)網(wǎng)
核心提示:厭氧菌(anaerobicbacteria)是一類(lèi)在無(wú)氧條件下比在有氧環(huán)境中生長(cháng)好的細菌,而不能在空氣(18%氧氣)和(或)10%二氧化碳濃度下的固體培養基表面生長(cháng)的細菌。這類(lèi)細菌缺乏完整的代謝酶體系,其能量代謝以無(wú)氧發(fā)酵的方式進(jìn)行。厭氧菌是人體正常菌群的組成部分,廣泛存在于人體皮膚和腔道的深部黏膜表面,在組織缺血、壞死,或者需氧菌感染的情況下,導致局部組織的氧濃度降低,才發(fā)生厭氧菌感染。

一、厭氧菌標本的送檢方法與處理
    標本送到實(shí)驗室后,應在20~30min內處理完畢,最遲不超過(guò)2h,以防止標本中兼性厭氧菌過(guò)度繁殖而抑制厭氧菌的生長(cháng)。如不能及時(shí)接種,可將標本置室溫保存(一般認為,冷藏對某些厭氧菌有害,而且在低溫時(shí)氧的溶解度較高)。
1)針筒運送:一般用無(wú)菌針筒抽取標本后,排盡空氣,針頭插入無(wú)菌橡皮塞,以隔絕空氣,立即送檢。這種方法多用于液體標本的運送,如血液、膿液、胸腹水、關(guān)節液等醫.學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。
2)無(wú)菌小瓶運送:一般采用無(wú)菌的青霉素小瓶,瓶?jì)燃右欢康呐囵B基和少量氧化還原指示劑,用橡皮蓋加鋁蓋固定密封,排除瓶?jì)瓤諝,充以C02氣體。同時(shí)先觀(guān)察瓶?jì)妊趸原指示劑的顏色,以判斷瓶?jì)仁欠駷闊o(wú)氧環(huán)境,如合格將用無(wú)菌注射器將液體標本注入瓶中即可。
3)棉拭子運送:一般不采用棉拭子運送,如果使用該方法,一定使用特制運送培養基,確保無(wú)氧環(huán)境,確保不被污染,確?焖偎蜋z。
4)厭氧罐或厭氧袋運送:將厭氧罐或厭氧袋內裝入可有效消耗氧氣的物質(zhì),確保無(wú)氧環(huán)境。該方法一般用于運送較大的組織塊或床邊接種的培養皿等。

二、厭氧菌的分離培養
    厭氧菌的分離培養主要分初代培養和次代培養兩個(gè)階段,其中初代培養相對比較困難,關(guān)鍵的問(wèn)題就是厭氧環(huán)境和培養基的選擇。初代培養的一般原則是:
1)先將標本涂片染色直接鏡檢,指導培養基的選擇。
2)盡量選用在厭氧菌中覆蓋面寬的非選擇性培養基。
3)最好多選1~2種覆蓋面不同的選擇性培養基。
4)盡量保證培養基新鮮。
5)要考慮到微需氧菌存在的可能。

1.選用適當的培養基接種:應接種固體和液體兩種培養基;
(1)培養基的使用,應注意下列各點(diǎn):
1)盡量使用新鮮培養基,2~4h內用完;
2)應使用預還原培養基,預還原24~48h更好;
3)可采用預還原滅菌法制作的培養基(用前于培養基中加入還原劑,如L-半胱氨酸、硫乙醇酸鈉、維生素C及葡萄糖等,盡可能使預還原劑處于還原狀態(tài));
4)液體培養基應煮沸10min,以驅除溶解氧,并迅速冷卻,立即接種;
5)培養厭氧菌的培養基均應營(yíng)養豐富,并加有還原劑與生長(cháng)刺激因子(血清、維生素K、氯化血紅素、聚山梨酯-80等)。

(2)培養基的選擇:初次培養一般都使用選擇培養基和非選擇培養基。
1)非選擇培養基:本培養基使分離的厭氧菌不被抑制,幾乎能培養出所有的厭氧菌。常使用心腦浸液瓊脂(BHI)、布氏瓊脂(BR)、胰豆胨肝粉瓊脂(GAM)、胰胨酵母瓊脂(EG)、CDC厭氧血瓊脂等。
2)選擇培養基:為有目的選擇常見(jiàn)厭氧菌株,以便盡快確定厭氧的種類(lèi)。

2.每份標本至少接種3個(gè)血平板,分別置于有氧,無(wú)氧及5%~10à2環(huán)境中培養,以便正確地培養出病原菌,從而判斷其為需氧菌、兼性厭氧菌、微需氧菌或厭氧菌中的哪一類(lèi)。
 
3.厭氧培養法
(1)厭氧罐培養法。
(2)氣袋法。
(3)氣體噴射法:又稱(chēng)轉管法。
(4)厭氧手套箱培養法:是迄今厭氧菌培養的最佳儀器之一。
(5)其他培養法:平板焦性沒(méi)食子酸法;生物耗氧法;高層瓊脂培養法。
 
4.厭氧狀態(tài)的指示:美藍和刃天青。無(wú)氧時(shí)均呈白色,有氧時(shí)美藍呈藍色,刃天青呈粉紅色。
 
 5.分離培養厭氧菌失敗的原因:
①培養前未直接涂片和染色鏡檢;
②標本在空氣中放置太久或接種的操作時(shí)間過(guò)長(cháng);
③未用新鮮配制的培養基;
④未用選擇培養基;
⑤培養基未加必要的補充物質(zhì);
⑥初代培養應用了硫乙醇酸鈉作為唯一厭氧菌培養基;
⑦無(wú)合適的厭氧罐或厭氧裝置漏氣;
⑧催化劑失活;
⑨培養時(shí)間不足;
⑩厭氧菌的鑒定材料有問(wèn)題。

三、厭氧菌直接鏡檢初步鑒別

     
coccus,球菌;b:bacillus,桿菌。
 

編輯:songjiajie2010

 
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關(guān)鍵詞: 厭氧菌 分離培養 初步鑒定
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