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菌落總數

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2010-05-11
核心提示:一、菌落總數介紹:  菌落是指細菌在固體培養基上生長(cháng)繁殖而形成的能被肉眼識別的生長(cháng)物,它是由數以萬(wàn)計相同的細菌集合而成

一、菌落總數介紹:

  菌落是指細菌在固體培養基上生長(cháng)繁殖而形成的能被肉眼識別的生長(cháng)物,它是由數以萬(wàn)計相同的細菌集合而成。當樣品被稀釋到一定程度,與培養基混合,在一定培養條件下,每個(gè)能夠生長(cháng)繁殖的細菌細胞都可以在平板上形成一個(gè)可見(jiàn)的菌落。

  菌落總數就是指在一定條件下(如需氧情況、營(yíng)養條件、pH、培養溫度和時(shí)間等)每克(每毫升)檢樣所生長(cháng)出來(lái)的細菌菌落總數。按國家標準方法規定,即在需氧情況下,37℃培養48h,能在普通營(yíng)養瓊脂平板上生長(cháng)的細菌菌落總數,所以厭氧或微需氧菌、有特殊營(yíng)養要求的以及非嗜中溫的細菌,由于現有條件不能滿(mǎn)足其生理需求,故難以繁殖生長(cháng)。因此菌落總數并不表示實(shí)際中的所有細菌總數,菌落總數并不能區分其中細菌的種類(lèi),所以有時(shí)被稱(chēng)為雜菌數,需氧菌數等。

  菌落總數測定是用來(lái)判定食品被細菌污染的程度及衛生質(zhì)量,它反映食品在生產(chǎn)過(guò)程中是否符合衛生要求,以便對被檢樣品做出適當的衛生學(xué)評價(jià)。菌落總數的多少在一定程度上標志著(zhù)食品衛生質(zhì)量的優(yōu)劣。

 

二、檢驗方法

  菌落總數的測定,一般將被檢樣品制成幾個(gè)不同的10倍遞增稀釋液,然后從每個(gè)稀釋液中分別取出1mL置于滅菌平皿中與營(yíng)養瓊脂培養基混合,在一定溫度下,培養一定時(shí)間后(一般為48小時(shí)),記錄每個(gè)平皿中形成的菌落數量,依據稀釋倍數,計算出每克(或每ml)原始樣品中所含細菌菌落總數。

  基本操作一般包括:樣品的稀釋?zhuān)瓋A注平皿--培養48小時(shí)--計數報告。

  國內外菌落總數測定方法基本一致,從檢樣處理、稀釋、傾注平皿到計數報告無(wú)何明顯不同,只是在某些具體要求方面稍有差別,如有的國家在樣品稀釋和傾注培養進(jìn),對吸管內液體的流速,稀釋液的振蕩幅度、時(shí)間和次數以及放置時(shí)間等均作了比較具體的規定。

  檢驗方法參見(jiàn):
GB4789.2-94 《中華人民共和國國家標準 食品衛生微生物學(xué)檢驗 菌落總數測定》
SN0168-92 《中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗行業(yè)標準 出口食品菌落計數》

 

三、說(shuō)明

(一)樣品的處理和稀釋?zhuān)?/p>

  1.操作方法:以無(wú)菌操作取檢樣25g(或25ml),放于225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jì)龋ㄆ績(jì)阮A置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經(jīng)充分振要或研磨制成1:10的均勻稀釋液。

  固體檢樣在加入稀釋液后,最好置滅菌均質(zhì)器中以8000~10000r/min的速度處理1min,制成1:10的均勻稀釋液。

  用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混合均勻,制成1:100的稀釋液。

  另取1ml滅菌吸管,按上項操作順序,制10倍遞增稀釋液,如此每遞增稀釋一次即換用1支1ml滅菌吸管。

  2.無(wú)菌操作:操作中必須有“無(wú)菌操作”的概念,所用玻璃器皿必須是完全滅菌的,不得殘留有細菌或抑菌物質(zhì)。所用剪刀、鑷子等器具也必須進(jìn)行消毒處理。樣品如果有包裝,應用75%乙醇在包裝開(kāi)口處擦拭后取樣。

  操作應當在超凈工作臺或經(jīng)過(guò)消毒處理的無(wú)菌室進(jìn)行。瓊脂平板在工作臺暴露15分鐘,每個(gè)平板不得超過(guò)15個(gè)菌落。

  3.采樣的代表性:如系固體樣品,取樣時(shí)不應集中一點(diǎn),宜多采幾個(gè)部位。固體樣品必須經(jīng)過(guò)均質(zhì)或研磨,液體樣品須經(jīng)過(guò)振搖,以獲得均勻稀釋液。

  4.樣品稀釋誤差:為減少樣品稀釋誤差,在連續遞次稀釋時(shí),每一稀釋液應充分振搖,使其均勻,同時(shí)每一稀釋度應更換一支吸管。

  在進(jìn)行連續稀釋時(shí),應將吸管內液體沿管壁流入,勿使吸管尖端伸入稀釋液內,以免吸管外部粘附的檢液溶于其內。

  為減少稀釋誤差,SN標準采用取10mL稀釋液,注入90mL緩沖液中。

  5.稀釋液:樣品稀釋液主要是滅菌生理鹽水,有的采用磷酸鹽緩沖液(或0.1%蛋白胨水),后者對食品已受損傷的細菌細胞有一定的保護作用。如對含鹽量較高的食品(如醬油)進(jìn)行稀釋?zhuān)梢圆捎脺缇麴s水。

(二)傾注培養

  1.操作方法:根據標準要求或對污染情況的估計,選擇2~3個(gè)適宜稀釋度,分別在制10倍遞增稀釋的同時(shí),以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液于滅菌平皿中,每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。

  將涼至46℃營(yíng)養瓊脂培養基注入平皿約15ml,并轉動(dòng)平皿,混合均勻。同時(shí)將營(yíng)養瓊脂培養基傾入加有1ml稀釋液(不含樣品)的滅菌平皿內作空白對照。

  待瓊脂凝固后,翻轉平板,置36±1℃溫箱內培養48±2h,取出計算平板內菌落數目,乘以稀釋倍數,即得每克(每毫升)樣品所含菌落總數。

  2.傾注用培養基應在46℃水浴內保溫,溫度過(guò)高會(huì )影響細菌生長(cháng),過(guò)低瓊脂易于凝因而不能與菌液充分混勻。如無(wú)水浴,應以皮膚感受較熱而不燙為宜。

  傾注培養基的量規定不一,從12~20ml不等,一般以15ml較為適宜,平板過(guò)厚可影響觀(guān)察,太薄又易于干裂。傾注時(shí),培基底部如有沉淀物,應將底部棄去,以免與菌落混淆而影響計數觀(guān)察。

  3.為使菌落能在平板上均勻分布,檢液加入平皿后,應盡快傾注培養基并旋轉混勻,可正反兩個(gè)方向旋轉,檢樣從開(kāi)始稀釋到傾注最后一個(gè)平皿所用時(shí)間不宜超過(guò)20min,以防止細菌有所死亡或繁殖。。

  4.培養溫度一般為37℃(水產(chǎn)品的培養溫度,由于其生活環(huán)境水溫較低,故多采用30℃)。培養時(shí)間一般為48h,有些方法只要求24h的培養即可計數。培養箱應保持一定的濕度,瓊脂平板培養48h后,培養基失重不應超過(guò)15%。

  5.為了避免食品中的微小顆;蚺嗷械碾s質(zhì)與細菌菌落發(fā)生混淆,不易分辨,可同時(shí)作一稀釋液與瓊脂培基混合的平板,不經(jīng)培養,而于4℃環(huán)境中放置,以便計數時(shí)作對照觀(guān)察。

  在某些場(chǎng)合,為了防止食品顆粒與菌落混淆不清,可在營(yíng)養瓊脂中加入氯化三苯四氮唑(TTC),培養后菌落呈紅色,易于分別。

(三)計數和報告

  1.操作方法:培養到時(shí)間后,計數每個(gè)平板上的菌落數?捎萌庋塾^(guān)察,必要時(shí)用放大鏡檢查,以防遺漏。在記下各平板的菌落總數后,求出同稀釋度的各平板平均菌落數,計算處原始樣品中每克(或每ml)中的菌落數,進(jìn)行報告。

  2.到達規定培養時(shí)間,應立即計數。如果不能立即計數,應將平板放置于0-4℃,但不得超過(guò)24h。

  3.計數時(shí)應選取菌落數在30~300之間的平板(SN標準要求為25~250個(gè)菌落),若有二個(gè)稀釋度均在30~300之間時(shí),按國家標準方法要求應以二者比值決定,比值小于或等于2取平均數,比值大于2則其較小數字(有的規定不考慮其比值大小,均以平均數報告)。

  4.若所有稀釋度均不在計數區間。如均大于300,則取最高稀釋度的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。如均小于30,則以最低稀釋度的平均菌落數乘稀釋倍數報告之。如菌落數有的大于300,有的又小于30,但均不在30~300之間,則應以最接近300或30的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。如所有稀釋度均無(wú)菌落生長(cháng),則應按小于1乘以最低稀釋倍數報告之。有的規定對上述幾種情況計算出的菌落數按估算值報告。

  5.不同稀釋度的菌落數應與稀釋倍數成反比(同一稀釋度的二個(gè)平板的菌落數應基本接近),即稀釋倍數愈高菌落數愈少,稀釋倍數愈低菌落數愈多。如出現逆反現象,則應視為檢驗中的差錯(有的食品有時(shí)可能出現逆反現象,如酸性飲料等),不應作為檢樣計數報告的依據。

  6.當平板上有鏈狀菌落生長(cháng)時(shí),如呈鏈狀生長(cháng)的菌落之間無(wú)任何明顯界限,則應作為一個(gè)菌落計,如存在有幾條不同來(lái)源的鏈,則每條鏈均應按一個(gè)菌落計算,不要把鏈上生長(cháng)的每一個(gè)菌落分開(kāi)計數。如有片狀菌落生長(cháng),該平板一般不宜采用,如片狀菌落不到平板一半,而另一半又分布均勻,則可以半個(gè)平板的菌落數乘2代表全平板的菌落數。

  7.當計數平板內的菌落數過(guò)多(即所有稀釋度均大于300時(shí)),但分布很均勻,可取平板的一半或1/4計數。再乘以相應稀釋倍數作為該平板的菌落數。

  8.菌落數的報告,按國家標準方法規定菌落數在1~100時(shí),按實(shí)有數字報告,如大于100時(shí),則報告前面兩位有效數字,第三位數按四舍五入計算。固體檢樣以克(g)為單位報告,液體檢樣以毫升(ml)為單位報告,表面涂擦則以平方厘米(cm2)報告。

編輯:foodadmin

 
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