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乳汁體細胞計數法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2010-06-21
核心提示:  推薦使用體細胞計數儀進(jìn)行乳汁體細胞計數! ◇w細胞計數法有直接計數法和間接計數法。直接計數法中簡(jiǎn)便易行的方法是直接

  食品伙伴網(wǎng)注:本方法源自奶牛乳房炎防治技術(shù)指南(試行)(農醫發(fā)[20l0]29號)

  推薦使用體細胞計數儀進(jìn)行乳汁體細胞計數。

  體細胞計數法有直接計數法和間接計數法。直接計數法中簡(jiǎn)便易行的方法是直接用顯微鏡進(jìn)行體細胞計數(SCC),間接計數法就是后面提到的CMT。法。

  l主要試劑和材料

  美藍染色液:美藍乙醇飽和溶液30mL.(美藍2g,95%乙醇100mL),10%氫氧化鈉溶液0.1mL,蒸餾水100mL,將上列溶液混合搖勻,過(guò)濾后備用。二甲苯、95%乙醇。生物顯微鏡、載玻片、l0μL。微量加樣器(或移液槍?zhuān)┑取?/p>

  2操作方法

  2.1涂片制備

  涂布:充分搖勻新鮮乳樣,用l0μL微量加樣器吸取中部乳汁l0μL,或用接種環(huán)蘸取等量的乳汁,將乳樣滴于玻片一端中側,仔細涂布成約lcm2。面積的乳膜(為便于操作,可在玻片下墊襯一張硬紙板,紙板上用毛筆劃數個(gè)面積為lcm2的方格透視)。

  干燥、脫脂、固定:涂好乳膜的玻片于37℃溫箱中干燥,然后用二甲苯脫脂5min,再置95%乙醇中固定5~10min。

  染色:玻片干燥后,用美藍染色液染色5min。水洗,再用95%乙醇脫色數分鐘,水洗干燥后鏡檢。

  鏡檢及計數:在生物顯微鏡油鏡下觀(guān)察(最好用l0×目鏡,其視野直徑要求為0.016),計數100個(gè)視野內的細胞數,然后用下式計算:SCC=100xN/Лr2

  視野面積Лr2=3.1416×(0.016/2)2。=0.0002cm2,

  顯微鏡系數N=I/0.0002×100=500,000

  SCC=系數×每個(gè)視野的細胞平均數(即細胞總數÷100):細胞數/mL乳。

  3判定標準

  隨著(zhù)國際和國內乳品行業(yè)的接軌,國內標準也在提高,一般以每毫升牛奶中含20萬(wàn)個(gè)細胞為亞臨床乳房炎的臨界值(+);超過(guò)該值為陽(yáng)性,低于該值則正常。

編輯:foodyy

 
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關(guān)鍵詞: 乳汁 體細胞
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