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幾種微生物實(shí)驗中常用的稀釋劑

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2011-01-05
核心提示:微生物檢驗和實(shí)驗中取樣后常常要做一系列的稀釋?zhuān)鸵玫较♂寗,本文將食品檢驗或者試驗中要用到的幾種稀釋劑做了一個(gè)概括介紹。

    大多數細胞都適合在pH值7.2-7.4范圍內生長(cháng),當然不同種類(lèi)細胞對pH值的要求也不盡一致,同一種細胞在不同生長(cháng)時(shí)期的最適pH值也有所不同。原代培養細胞對pH值要求較嚴,傳代培養細胞對pH值要求較寬。一般來(lái)講,細胞對偏酸環(huán)境的耐受性要強于偏堿環(huán)境。培養過(guò)程中,嚴格控制培養液的pH值,有利于細胞的生長(cháng)。細胞生長(cháng)越旺盛,代謝越活躍,pH值改變越迅速。代謝物的滯留使培養液變酸變黃,對細胞生長(cháng)不利。因此,通常在培養液中均加入一定量的緩沖液,以保持pH值在一定范圍內的相對穩定。

    平衡鹽溶液(Balanced Salt Solution,BSS)與細胞生長(cháng)狀態(tài)下的pH值、滲透壓等環(huán)境狀態(tài)一致,具有維持滲透壓、控制酸堿平衡、供給細胞生存代謝所必需的能量和無(wú)機鹽成分等作用,可滿(mǎn)足體外實(shí)驗中,細胞生存并維持一定的代謝的基本需要。細胞在BSS中可生存幾個(gè)小時(shí),且BSS配方簡(jiǎn)單,成本低,因此成為配制各種組織細胞培養用液的基礎溶液,也是組織細胞體外短暫保存,分離、純化和洗滌等實(shí)驗操作的常用溶液。

    磷酸鹽緩沖液(PBS) 是最常用的平衡鹽溶液(BSS)之一。由磷酸一氫鹽和磷酸二氫鹽的混合溶液組成,其中磷酸一氫鹽是呈堿性的,而磷酸二氫鹽是呈酸性的。當微生物分泌酸性物質(zhì)時(shí)會(huì )與磷酸一氫鹽反應生成磷酸二氫鹽;當分泌堿性物質(zhì)時(shí)則與磷酸二氫鹽反應生成磷酸一氫鹽。這樣就使整個(gè)體系維持在一個(gè)PH較穩定的范圍。由于磷酸緩沖液近中性,恰在生理性pH范圍緩沖力最強,且成本相對較低,成為生命科學(xué)領(lǐng)域應用最廣、最普及的無(wú)機鹽緩沖液,也是免疫學(xué)、細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗室必備的常用緩沖液之一。

    0.85%生理鹽水 能保持細胞內衛的滲透壓一致,避免細菌的細胞壁被破壞而影響細菌的生長(cháng)和繁殖。避免細胞破裂,它可以使細胞在一個(gè)液體環(huán)境中,維持正常生理學(xué)平衡。避免操作過(guò)程中微生物失水或吸水過(guò)多,導致死亡。菌落總數要求不太高,但是生理鹽水對于滲透壓的維持還是有一定作用的,特別是對于那些“半死半活”細菌的檢出很重要。但生理鹽水也不是在任何情況下都適用的,檢測鹽份較高的樣品時(shí)(如烤鰻、醬油等),不適合采用生理鹽水,這種情況下用蒸餾水更合適。磷酸鹽緩沖稀釋液是SN(出口食品行業(yè)檢驗標準)檢測菌落總數時(shí)推薦時(shí),在GB中倒沒(méi)明確提出這個(gè),而是一般性推薦生理鹽水。由于磷酸鹽緩沖稀釋液配制較為復雜,所以在正常情況下檢測一般樣品用生理鹽水,當樣品鹽份較高時(shí)用蒸餾水。
   
    無(wú)菌水通常是滅菌后的蒸餾水。做霉菌和酵母檢驗的稀釋液,用的就是蒸餾水。GB 4789.15-1994使用過(guò)高鹽查氏培養基,樣品稀釋再使用生理鹽水,容易搞亂鹽濃度。所以,標準制定者叫選擇了蒸餾水。實(shí)際上,蒸餾水無(wú)論對于單細胞的原核生物還是真核生物,都是有害的。從GB/T 4789.15-2003開(kāi)始,刪除了這種培養基。但是沒(méi)有改變蒸餾水。在具體工作中,還是盡量不要使用蒸餾水來(lái)稀釋樣品為好。因為通常一份樣品常常需要同時(shí)檢驗細菌和真菌,不可能單獨稱(chēng)量,之后分別稀釋的。

    蛋白胨是動(dòng)植物蛋白經(jīng)酶水解后的月示、胨、肽及氨基酸等復雜的混合物,吸濕性很強,易溶于水,系兩性電解質(zhì),有一定緩沖作用。有學(xué)者自己做實(shí)驗時(shí)候用蛋白胨水代替磷酸鹽或者生理鹽水稀釋?zhuān)康氖亲寴悠分芯N在稀釋過(guò)程中保持活性,免于死亡,但是稀釋時(shí)間一定要控制在15分鐘之內。
 

編輯:songjiajie2010

 
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